Tes ELISA mendeteksi banyak penyakit, itulah sebabnya tes ini banyak digunakan dalam pengobatan dan banyak lagi. Namun, tes ELISA paling dikenal untuk diagnosis penyakit Lyme. Apa tes ELISA? Bagaimana menafsirkan hasil? Berapa harga tesnya?
Daftar Isi:
- Tes ELISA - apa yang dideteksi? Penerapan tes ELISA
- Tes ELISA - apa tesnya?
- Tes ELISA dan penyakit Lyme - kapan harus tampil?
- Tes ELISA - harga. Berapa biaya tes ELISA?
- Tes ELISA - hasil. Bisakah mereka menjadi positif palsu?
- Tes ELISA - hasil. Bisakah mereka menjadi negatif palsu?
Tes ELISA, yaitu enzyme-linked immunosorbent assay, adalah metode laboratorium yang umum digunakan yang melayani, antara lain, untuk deteksi kuantitatif antibodi dalam darah.
Untuk alasan ini, tes ELISA telah menemukan aplikasi dalam diagnosis penyakit bakterial, seperti Lyme borreliosis.
Keuntungan dari metode ELISA adalah kesederhanaannya dan kemungkinan implementasi yang cepat serta sensitivitas yang tinggi. Metode ELISA dilakukan dengan menggunakan pelat plastik khusus dengan sumur yang diisi misalnya protein Borrelia (antigen) dan antibodi monoklonal spesifik, yang dirancang untuk mendeteksi antibodi dalam sampel pasien.
Tes ELISA - apa yang dideteksi? Penerapan tes ELISA
Sensitivitas dan kesederhanaan yang tinggi dari metode ELISA membuatnya dapat diterapkan dalam diagnosis banyak penyakit, tetapi paling dikenal sebagai metode diagnostik penyakit Lyme.
Dalam kasus diagnosis borreliosis Lyme, yang disebut ELISA tidak langsung, yang memungkinkan untuk mendeteksi IgM atau IgG spesifik dalam bahan yang diuji. Dengan cara yang sama, antibodi dapat dideteksi untuk diagnosis:
- Infeksi virus: virus herpes (herpes, herpes zoster, Epstein-Barr, cytomegalovirus), HIV, virus hepatitis (HBV dan HCV)
- Infeksi protozoa: toksoplasmosis, giardiasis
- penyakit autoimun: penyakit celiac (antibodi anti-tTG atau anti-DPG), penyakit Hashimoto (antibodi anti-TG dan anti-TPO), penyakit radang usus (antibodi anti-ASCA dan anti-ANCA)
- penyakit parasit dan alergi di mana antibodi IgE spesifik terdeteksi. Kadar yang meningkat mungkin menunjukkan adanya alergi, misalnya terhadap serbuk sari dan makanan, atau infestasi parasit (cacing pita bersenjata, cacing gelang manusia)
Ada juga modifikasi pada metode ELISA (yang disebut ELISA sandwich), yang memungkinkan deteksi sampel protein selain antibodi. Kemudian tujuan dari pengujian ini adalah untuk mendeteksi materi biologis:
- fragmen virus atau bakteri, paling sering merupakan karakteristik antigen untuk patogen tertentu
- hormon serum, misalnya estrogen, prolaktin, TSH, fT4, kortisol
- enzim, misalnya calprotectin, elastase pankreas, alkali fosfatase
- penanda tumor, misalnya CA-125
- adanya obat dalam serum
Metode ini juga dapat diterapkan di industri makanan, yang dapat mendeteksi jejak alergen (misalnya susu, kacang tanah), GMO, atau racun dalam makanan.
Tes ELISA - tentang apa itu?
Diagnosis, misalnya, Lyme borreliosis dengan menggunakan metode ELISA terdiri dari pendeteksian protein imun dalam bahan biologis - antibodi yang muncul selama respons terhadap antigen Borrelia.
Antibodi diuji dalam dua kelas, IgM dan IgG. IgM adalah antibodi pertama yang muncul di tubuh saat bersentuhan dengan bakteri, dan menurun seiring waktu.
Tempatnya digantikan oleh antibodi IgG yang lebih gigih yang dapat bertahan di dalam tubuh selama beberapa lusin tahun.
Dengan cara ini, keberadaan bakteri di dalam tubuh secara tidak langsung diuji dengan mendeteksi antibodi yang secara khusus ditujukan untuk melawan Borrelia spirochetes.
Antibodi pada berbagai tahap infeksi mungkin ditujukan untuk melawan berbagai protein Borrelia. Misalnya, pada tahap awal itu adalah protein p41.
Pada tahap selanjutnya, semakin banyak protein mulai bermunculan, seperti p21, p30, p39, p43. Inilah alasan mengapa diagnosis penyakit Lyme sangat sulit.
Pemilihan protein bakteri sangat penting agar tes memiliki nilai diagnostik yang tinggi. Oleh karena itu, secara rutin dalam diagnosis penyakit Lyme, tes ELISA generasi II atau generasi III harus digunakan, di mana set protein dipilih untuk mendapatkan hasil yang paling andal.
Tes ELISA dan penyakit Lyme. Kapan melakukannya?
Lyme borreliosis adalah penyakit bakteri yang disebabkan oleh bakteri Borrelia burgdorferi dan banyak variasinya.
Diagnosis penyakit ini tidak sederhana karena kompleksitas respon imun terhadap Borrelia dan ketidaksempurnaan metode laboratorium.
Metode laboratorium yang paling umum digunakan adalah metode ELISA yang sangat sensitif, yang mendeteksi antibodi spesifik yang dibangkitkan terhadap protein bakteri.
Dalam diagnosis borreliosis Lyme, metode ELISA tidak langsung digunakan di mana tahap-tahap berikut dibedakan:
- inkubasi sumur di atas piring dengan bahan yang dikumpulkan dari pasien, misalnya serum. Jika ada antibodi yang melawan Borrelia dalam bahan yang diuji, mereka akan menempel pada protein di bagian bawah reaksi dengan baik
- kemudian kelebihan serum dibilas dengan cairan pencuci khusus (buffer) dan biasa disebut konjugasi, yaitu antibodi yang terkait dengan enzim yang mengikat antibodi yang sebelumnya terkait di sumur reaksi
- kemudian substrat untuk konjugat ditambahkan dan terjadi reaksi warna (hasil positif) atau tidak ada reaksi warna (hasil negatif)
- langkah terakhir adalah pembacaan oleh pembaca (spektrofotometer) konsentrasi antibodi terhadap Borrelia dalam serum pasien.
Tes ELISA untuk penyakit Lyme dilakukan dari darah, dan dalam kasus gejala neurologis (neuroborreliosis), juga dari cairan serebrospinal.
Cairan sinovial tidak boleh diuji karena ada kemungkinan besar hasil positif palsu.
Dasar diagnosis penyakit adalah gejala klinis yang menunjukkannya, dikonfirmasi oleh hasil tes laboratorium.
Penambahan hasil tes laboratorium tanpa gejala tidak mengesahkan diagnosis penyakit Lyme, karena terbukti bahwa antibodi terhadap Borrelia juga terdeteksi pada orang sehat.
Diagnosis serologis Lyme borreliosis dimulai dengan tes ELISA skrining semi-kuantitatif. Jika hasilnya negatif, berarti tidak ada Borrelia spirochetes yang terdeteksi atau negatif palsu.
Jika hasilnya positif atau positif lemah (samar-samar), pengujian Western blot konfirmasi, yang ditandai dengan spesifisitas tinggi, harus dilakukan.
Ini untuk mengkonfirmasi bahwa hasil ELISA adalah "benar". Selama diagnosis, Anda tidak dapat melewatkan langkah-langkah di atas dan, misalnya, segera melakukan diagnosis menggunakan metode Western blot atau membuat diagnosis berdasarkan hasil ELISA positif saja.
Di Polandia, diagnosis penyakit Lyme sangat sering berakhir pada tahap skrining pertama, yang menyebabkan salah tafsir dari hasil positif atau lemah positif.
Artikel yang direkomendasikan:
Tes transformasi limfosit (LTT) baik untuk mengetahuiTes ELISA - harga. Berapa biaya tes ELISA?
Biaya tes sekitar PLN 60 dan langsung selesai. Namun, Anda bisa menunggu sekitar tiga bulan untuk mendapatkan hasil rujukan.
Tes ELISA - hasil. Bisakah mereka menjadi positif palsu?
Hasil positif palsu dihasilkan dari reaktivitas silang antibodi IgM dengan protein lain. Antibodi yang diproduksi oleh tubuh mungkin 'salah' mengenali antigen dari mikroorganisme lain sebagai antigen Borrelia.
"Kesalahan" paling umum terjadi pada orang yang terinfeksi treponema pallidum, herpesvirus, dan pada orang dengan lupus eritematosus sistemik dan penyakit rematik lainnya.
Tes ELISA - hasil. Bisakah mereka menjadi negatif palsu?
Hasil negatif palsu mungkin muncul pada tahap awal infeksi, dalam hal ini tes harus diulang setelah sekitar 3-4 minggu. Ini disebut jendela serologis, yaitu periode awal infeksi di mana tubuh belum "berhasil" memproduksi antibodi spesifik.
Hal yang sama berlaku untuk orang dengan imunodefisiensi yang tidak menghasilkan cukup antibodi.
Masalah besar, terutama pada infeksi yang sangat intens, adalah munculnya apa yang disebut kompleks imun yang terdiri dari antigen Borrelia spirochetes dan antibodi khusus untuk mereka.
Akibatnya, antibodi menjadi "tidak terlihat" untuk metode yang umum digunakan seperti ELISA, dan meskipun ada dalam bahan yang diuji, mereka tidak dapat dideteksi.
Dalam kasus seperti itu, laboratorium mungkin menggunakan penguraian kompleks imun. Perawatan ini dirancang untuk melepaskan antibodi. Namun metode ini belum banyak digunakan karena kurangnya standarisasi di laboratorium.
Patut diketahuiMengapa diagnosis penyakit Lyme tidak mudah?
Hal ini disebabkan kompleksitas respon imun terhadap Borrelia dan keterbatasan metode laboratorium. Keragaman varietas dan munculnya yang baru yang menyebabkan infeksi, terutama di benua Eropa, tidak memfasilitasi pengembangan metode diagnostik yang efektif.
Lebih banyak varietas baru-baru ini muncul di Eropa, seperti Borrelia bissetii, Borrelia valaisiana dan Borrelia spielmanii. Selain itu, di dalam tubuh, Borrelia spirochetes dapat berubah menjadi kista atau menetap di tempat-tempat tubuh yang tidak dapat diakses oleh sel-sel sistem kekebalan.
Dengan demikian "tidak terlihat" oleh sistem kekebalan. Selain itu, telah ditunjukkan bahwa jaringan mungkin mengandung fragmen bakteri yang memiliki sifat pro-inflamasi yang kuat. Mereka diyakini bertanggung jawab atas gejala kronis penyakit Lyme, meskipun hasil tes laboratorium negatif.
literatur
1. Penyakit Witecka-Knysz E. dkk. Lyme: mengapa diagnosis begitu sulit? Diagnostik Laboratorium April 2007.
2. Moore A. et al.Pedoman Saat Ini, Kesalahan Umum Klinis, dan Arah Masa Depan untuk Diagnosis Laboratorium Penyakit Lyme, Amerika Serikat. Emergency Infect Dis. 2016 Juli; 22 (7).
3. Diagnosis laboratorium penyakit yang ditularkan melalui kutu. Rekomendasi Kelompok Kerja: Kamar Nasional Dokter Laboratorium, Institut Nasional Kesehatan Masyarakat-Institut Kebersihan Nasional, Konsultan Nasional di bidang penyakit menular, Departemen Penyakit Menular dan Infeksi Saraf, Universitas Kedokteran Białystok, Perkumpulan Virologi Polandia, Warsawa 2014
4. Hosseini S. et al.: Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA) From A to Z. Springer 2017.
